Esfera LeProlif™: los portadores esféricos se cultivan en biorreactores de mesa. Aplicación del cultivo de células Vero y realización de expansión de perla a perla.
Introducción
Las células Vero son un tipo de células adherentes muy utilizadas como plataforma para producir vacunas virales. En un biorreactor de mesa, las células Vero normalmente crecen en la superficie de microportadores esféricos.
Los microportadores esféricos LeProlif™ Sphere se utilizan para cultivar células adherentes con altos rendimientos. Proporcionan una superficie adecuada para el crecimiento de células animales y pueden usarse en un sistema de cultivo en suspensión. También pueden aumentar el rendimiento celular en recipientes de cultivo celular de una sola capa (como placas, platos y frascos de cultivo) y cámaras de perfusión.
Este estudio realizó una inoculación estéril de células Vero en microportadores en recipientes de vidrio de 2 litros y 10 litros, controlando el proceso a través de un biorreactor de mesa. En esta prueba, la concentración de microportadores fue baja y se emplearon métodos de cultivo regulares sin necesidad de alimentación adicional ni cambios de medio, logrando la proliferación y expansión celular. Las células Vero cultivadas alcanzaron una alta densidad; con una concentración de microportador de 3 g/l y una densidad de siembra inicial de 1,2 x 105 células/ml, al cuarto día, la densidad celular alcanzó alrededor de 1,4 x 106 células/ml, manteniendo una viabilidad superior al 90 %. Las células se recolectaron digiriéndolas enzimáticamente de las esferas y se transfirieron a portadores esféricos nuevos o existentes, lo que permitió un cultivo ampliado al transferir células de una esfera a otra. Además, aumentar la concentración de portadores puede aumentar la densidad celular. Esto confirma el importante potencial del uso de LeProlif™ Sphere para cultivar células Vero para la producción de vacunas.
Materiales y equipos
En el biorreactor de mesa con frasco de vidrio de 2 litros, realizamos pruebas sobre el crecimiento de células Vero en soportes esféricos para comprender las características de proliferación de las células Vero dentro del biorreactor de mesa. Posteriormente, amplificamos aún más este proceso al biorreactor de vidrio de 10 litros mediante expansión de perla a perla, proporcionando información relevante. Referencias para la aplicación de células Vero en la preparación de virus.
Microportadores LeProlifTM
- A base de dextrano reticulado
- Área de superficie aproximadamente 4400 cm2/g
- El proceso especial de modificación de la superficie mejora la tasa de adhesión celular y la uniformidad, lo que respalda el cultivo de perfusión de alta densidad
- Puede usarse para cultivos en suspensión en biorreactores de vidrio/biorreactores de un solo uso, lo que facilita el aumento de escala.
- Las células se pueden recolectar liberándolas de la superficie de las microesferas.
Biorreactor LePhinixⓇ EZG
- Los soportes esféricos, después de ser esterilizados en autoclave, se sueldan asépticamente al reactor a través de un puerto de transferencia.
- Puede usarse con malla de acero inoxidable para cultivo de perfusión, reteniendo microportadores en el recipiente para operaciones de cambio de medio o recolección de células.
- Volumen de trabajo: 1L-10L Un biorreactor de mesa de 10L puede cultivar hasta 10L con una concentración de portador de 3g/L, proporcionando una superficie de adherencia celular de 132.000cm2.
Proceso de cultivo celular
Las células semilla se cultivaron y prepararon en un matraz T y finalmente se transfirieron a un biorreactor de escritorio con frasco de vidrio de 2 litros.
Configuración del cultivo celular
Las células Vero se cultivan en biorreactores de mesa LePhinixⓇ EZG de 2 litros y 10 litros.
Conclusión
Con una concentración de portador de 3 g/L y una densidad de siembra celular inicial de 1,2E5/mL, después de 4 días de cultivo, aumentando de 1,5 L a 4 L mediante expansión de perla a perla y aumentando aún más hasta 10 L, la célula la densidad aumentó aproximadamente 14 veces mientras se mantenía una viabilidad consistentemente por encima del 90,0%. En diferentes escalas de ampliación dentro de los frascos de vidrio, se observó un alto nivel de consistencia, lo que demuestra efectos favorables de cuenta a cuenta, como se muestra en las Figuras 4, 5 y 6.
Resumen
- Los biorreactores de mesa LePhinixⓇ EZG de 2 litros y 10 litros respaldan de manera excelente el cultivo celular utilizando microportadores esféricos de 3 g/l. Junto con nuestra malla de acero inoxidable, permiten la expansión de cordón a cordón al tiempo que garantizan un control preciso.
- Bajo una concentración de portador de 3 g/l, las células Vero alcanzaron una densidad celular de alrededor de 1,4 x 106 células/ml al cuarto día de cultivo en el recipiente. Para garantizar una expansión exitosa de perla a perla, 1,4 × 106 células/ml no es la densidad máxima que se puede lograr, y aumentar la concentración del portador puede mejorar la densidad celular final. Esto demuestra el inmenso potencial de las células Vero en la preparación de virus.
- El biorreactor de mesa LePhinixⓇ EZG, combinado con una malla de acero inoxidable, facilita el cultivo de perfusión. El tamaño y la cantidad de impulsores de agitación se pueden ajustar según las necesidades de los clientes para diferentes concentraciones de portadores, brindando servicios personalizados.
Fuente: Lepure Biotech