En los últimos años, la necesidad de estrategias mejoradas de producción de ADN de plásmido de alto rendimiento ha aumentado significativamente debido a su aplicación en el campo de las vacunas de ARN mensajero (ARNm) y la terapia génica.
Fuente: Eppendorf, Inc.
Por Nina Schrand y Ma Sha, Eppendorf
Para satisfacer la demanda de pDNA para su uso en la industria biofarmacéutica, el procesamiento previo debe optimizarse para maximizar la cantidad de pDNA producido. Lo que podría lograrse maximizando la concentración celular final y el número promedio de copias de plásmidos. Como el título del plásmido está directamente relacionado con la formación de biomasa, las estrategias de fermentación se basan en el aumento de la densidad celular total.
Una fermentación por lotes con la célula huésped E. coli DH5α bien caracterizada da como resultado una mayor tasa de crecimiento y la capacidad de lograr altas densidades celulares con requisitos mínimos de nutrientes, con la consiguiente reducción de los costos de fabricación.
Además de la preparación de ADN de alta pureza, la alta concentración también es un requisito previo para obtener valores de producción óptimos. El objetivo de un proceso de producción es limitar los contaminantes como el ADN genómico (ADNg) o el ARN y trabajar hacia una estructura conformacional unificada del ADN plasmídico. En estudios anteriores, se encontró que la contaminación con gDNA se puede reducir significativamente al adoptar un cultivo discontinuo alimentado en lugar de un cultivo discontinuo.
Estudio
En este estudio, describimos la viabilidad de la producción de plásmidos en el sistema Eppendorf DASbox Mini Bioreactor . Nuestro objetivo era aumentar el rendimiento general en comparación con estudios anteriores realizados con Eppendorf Conical Tubes. También analizamos el efecto de un proceso de alimentación por lotes en comparación con un proceso por lotes.
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