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Nueva resina cromatográfica para purificación de Anticuerpos Monoclonales TOYOPEARL Super A

Vigenius — Mon, 28 Oct 2024 20:48:18 +0000

La nueva resina de afinidad de @Tosoh Bioscience – Separation & Purification para purificación de AcMo.

Basada en proteína A recombinante, la resina Super A fue diseñada para obtener una alta capacidad dinámica de binding (DBC) y resistir tratamientos rigurosos de limpieza con álcali (CIP), y además presenta un excelente comportamiento flujo/presión. Las modificaciones del ligando permiten realizar eluciones más suaves, a pH no tan ácidos, lo cual implica menor agregación del anticuerpo durante esta parte del proceso. Estas propiedades permiten obtener pools de elución de menor volumen (más concentrados), con una significativa reducción de impurezas del proceso.

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Fuente: Tosoh

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The path to genderless connectors

Vigenius — Mon, 14 Oct 2024 19:52:47 +0000

El camino hacia los conectores sin género: cómo los conectores estériles sin género conducen a una mayor flexibilidad, cambios entre lotes más rápidos y menores costos.
Los conectores estériles sin género, con su capacidad para interconectarse entre sí sin limitaciones pueden aumentar la flexibilidad de sistemas de un solo uso en una amplia gama aplicaciones. Estos conectores reducen la complejidad del sistema, lo que a su vez optimiza la gestión de inventarios, simplifica la capacitación de los operadores y reduce los errores del operario al momento del armado de los sistemas.

De hecho, es posible que este nuevo diseño de conector impulse un cambio en la industria similar a la transición desde sistemas inoxidables y reutilizables hasta sistemas de un solo uso. ¿Cómo puede tener algo tan pequeño como un conector tener este impacto? La respuesta, en esta Application Note.

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Fuente: CPC

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Single Use Beta Bags: One time Use, multiple benefits

Vigenius — Fri, 04 Oct 2024 18:57:57 +0000

Las nuevas Beta Bags single use de Central Research Laboratories® (CRL) pueden mejorar el costo general, la eficiencia y los riesgos de contaminación en los procesos de fabricación aséptica.

El desarrollo de productos farmacéuticos requieren una proceso de manufactura aséptio,, lo que significa que esté libre de contaminación causada por bacterias, virus u otros microorganismos. Las bolsas beta single use son una tecnología que se ha vuelto cada vez más popular en la cartera de productos asépticos, específicamente en procesos de esterilización y transferencia de componentes a cabinas aisladas como isolators en sectores de Llenado Final.

Este documento técnico demuestra por qué estos nuevos modelos de bolsas beta de un solo uso están estableciendo un estándar más alto en diseño, operación y versatilidad.

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Fuente: CRL

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Freeze-drying in protective bags: Characterization of heat and mass transfer

Vigenius — Wed, 18 Sep 2024 22:46:04 +0000

Durante la liofilización de Ingredientes Farmacéuticos Activos (API) altamente potentes, la posible contaminación del liofilizador es un problema importante de seguridad. Dado que los tapones están en posición semi-taponada durante el proceso de liofilización, el API puede contaminar la cámara y también puede ocurrir contaminación cruzada. En este estudio se investigaron dos bolsas protectoras, que envuelven cada bandeja, y su influencia en la transferencia de calor y masa durante la liofilización. Se realizaron pruebas de sublimación utilizando agua purificada o soluciones que contenían trehalosa, así como hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPbCD) como agentes formadores de masa.

Durante las pruebas de sublimación con agua purificada, ambas bolsas influyeron claramente en la transferencia de calor y masa en comparación con los viales de referencia sin embalar. La bolsa, que originalmente fue diseñada para ser utilizada en la esterilización por vapor, tuvo un impacto considerable en las características de secado. La membrana de la bolsa se convirtió en el factor limitante de la velocidad, generando un compartimento separado dentro de la bolsa. En este compartimento, la presión de vapor es mucho mayor en comparación con la presión de la cámara durante el secado primario, lo que conduce a condiciones de secado alteradas. Sin embargo, el secado aún fue posible.

La otra bolsa, que fue diseñada específicamente para la liofilización, también tuvo un impacto en el comportamiento del secado que se pudo atribuir a la lámina entre el estante y el fondo de los viales. Esto se detectó como diferencias en los valores de Kv. Sin embargo, la resistencia de la membrana se vuelve insignificante cuando se secaron soluciones al 10% (p/p) de trehalosa o HPbCD utilizando esta última bolsa como contenedor. Los datos reportados en este trabajo demuestran la relevancia y el valor de las pruebas de sublimación para comprender el proceso de liofilización, especialmente cuando se implementan nuevos componentes. Los datos deben considerarse cuando se realice la liofilización utilizando este tipo de bolsas.

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Fuente: Teclen

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Peroxide Cured vs Platinum Cured Silicone Tubing

Vigenius — Tue, 03 Sep 2024 21:05:04 +0000

Al analizar las alternativas de mangueras para la industria farmacéutica, uno puede encontrarse con algunos desafíos. Contar con la información relativa a la adaptabilidad del material para cada aplicación ayuda a tomar la decisión final. En este documento, NewAge presenta una guía para eficientizar dicha selección, cuando se evalúa la silicona como material de manguera y compara si es curada al Platino o al Peróxido.

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Fuente: New Age Industries

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Advantages of Single-Layer Film vs. Multilayer Film for use in Bio-processing bags

Vigenius — Tue, 27 Aug 2024 20:19:33 +0000

Las bolsas single-use están formadas generalmente de films multi-capas que incluyen distintas variantes de PE (ULDPE, LLDPE, ULDPE, EVA, EVOH, PA o PET).
Existe actualmente un único fluoropolímero disponible en el mercado conocido por tener la pureza química, resistencia mecánica y estabilidad gamma requeridas (distinto a PTFE y FEP) y al mismo tiempo atender las inquietudes del mercado sobre E&L. Si a eso le sumamos que soporta altos rangos de Temperaturas, este film promete ser un «game-changer» en los films de manufactura de los biocontenedores para la industria biofarmacéutica.
En este trabajo se analizan los biocontenedores plásticos para las distintas aplicaciones de almacenamiento de fluidos de bioprocesos, los desafíos asosciados con ellos, y los desarrollos de tecnología dirigidos a superarlos. Específicamente, se focaliza en los materiales que permiten el cambio de formato multi-capa a capa única.

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Fuente: Entegris

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Continuous Buffer Management System: Large – Scale Buffer Preparation

Vigenius — Tue, 13 Aug 2024 16:33:36 +0000

Este trabajo explora el concepto de Sistema de Manejo Contínuo de Buffers (CBMS) como una alternativa a la preparación de buffers en bulk dentro de tanques tradicionales. Al analizar en detalle la progresión histórica de la preparación de buffers en la industria farma, este paper resalta las ventajas económicas y operativas ofrecidas por CBMS. A su vez, profundiza en los desafíos técnicos asosicados a la construcción de estos sistemas y presenta las generalidades de sus componentes (hardware), diseño, y estrategias decontrol del proceso. Este trabajo también discute el concepto de llenado único en CBMS así como los resultados de su implementación, con ejemplos reales de este tipo de sistemas.

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Fuente: Lisure

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Characterization of freezing processes in drug substance bottles by Ice Core Sampling

Vigenius — Mon, 29 Jul 2024 20:27:30 +0000

El congelado y descongelado de moléculas biológicas son operaciones críticas durante su manufactura y deben estar bien caracterizadas para minimizar el impacto en la calidad del producto. En este estudio se demuestra el desarrollo de un método simple y rápido para el análisis de la crioconservación en estado congelado del API teniendo en cuenta en su evaluación parámetros del proceso independientes del producto tales como: tipo de freezer, temperatura target de congelado, tipo de contenedor, tamaño del contenedor, etc. A su vez, se presenta una técnica novedosa para la toma de muestra a partir de la perforación de núcleos de hielo en combinación con el uso de una solución sustituta que permite la caracterización apropiada del proceso de congelamiento en botellas identificándose parámetros críticos del proceso para estudios futuros.

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Fuente: Sanisure

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Fases móviles para cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC)

Vigenius — Tue, 16 Jul 2024 20:21:29 +0000

¿Está buscando métodos de cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) más eficientes y eficaces dirigidos a ADC y mAb? La columna de butilo TSKgel HIC-ADC está optimizada para estas muestras. Esta nota de aplicación destaca cómo las modificaciones en la fase móvil (específicamente el pH, la adición de disolventes orgánicos, la concentración de sal y las velocidades de mezcla en gradiente) pueden mejorar significativamente la eficacia de las separaciones HIC.

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Fuente: Tosoh Bioscience – Separaciones y Purificación

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Aumento de los números de iPSC vía la optimización de los procesos de cultivo

Vigenius — Wed, 15 May 2024 20:48:31 +0000

Las células madre humanas pluripotentes inducidas (human Induced Pluripotent Stem Cells, hiPSC) son invaluables para diversas aplicaciones, como el descubrimiento de fármacos y el modelado de enfermedades, pero requieren de la obtención de un gran número de células para poder desarrollarlas. Lograr estas altas densidades celulares es un desafío con los métodos de cultivo 2D, pero los biorreactores de tanque agitado ofrecen un entorno 3D propicio para controlar y optimizar las condiciones de crecimiento de las iPSC.

En una nota de aplicación reciente de Eppendorf, denominada » Aumento del Número de iPSC Mediante la Optimización Sistemática del Proceso de Cultivo «, los investigadores utilizaron biorreactores de tanque agitado para proporcionar un entorno de cultivo 3D propicio para condiciones óptimas de crecimiento de hiPSC. Al emplear DASbox® Mini Bioreactors y el DASbox Mini Bioreactor System y optimizar sistemáticamente los parámetros del proceso, lograron un aumento notable en la densidad celular, superando 10 veces en comparación frente a condiciones no controladas, manteniendo al mismo tiempo las características y la viabilidad de las células madre.

La nota de aplicación describe un proceso de optimización que utiliza ajustes sistemáticos de parámetros y modelado “in silico”. Como resultado, la densidad celular aumentó significativamente y al mismo tiempo se mantuvieron las propiedades y la viabilidad de las células madre. El estudio subraya la importancia de los métodos de cultivo basados en biorreactores para avanzar en la investigación de células madre y sus aplicaciones terapéuticas.

INFLUENCIA DEL PH, LA ALIMENTACIÓN DE GLUCOSA Y EL CONTROL DE DO EN EL CULTIVO DEL BIORREACTOR hIPSC

El estudio utilizó el sistema de mini biorreactor DASbox para monitorear y controlar con precisión el pH, la alimentación con glucosa y los niveles de oxígeno disuelto (DO) en el cultivo. El control del pH se inició con un punto de ajuste de 7,0, lo que dio como resultado valores de pH estables durante todo el experimento y un mayor consumo de glucosa en comparación con las condiciones no controladas. La estrategia de alimentación con glucosa desde el día 3 en adelante aumentó aún más las concentraciones de glucosa pero también elevó los niveles de lactato. El control de DO con un punto de ajuste del 40% desde el primer día proporcionó un suministro de oxígeno más estable, aunque los niveles iniciales de DO fueron más bajos. Diferentes configuraciones de parámetros de crecimiento influyeron en las densidades celulares, y el control del pH y la suplementación con glucosa produjeron aumentos significativos en comparación con las condiciones no controladas. Sin embargo, el control de DO por sí solo no mejoró sustancialmente la densidad celular. El estudio sugiere un efecto compensatorio de la suplementación con DO en momentos posteriores, pero se necesita una mayor adaptación de la estrategia de DO para reducir la pérdida celular temprana y controlar el tamaño de los agregados. En general, los valores de pH controlados y la alimentación con glucosa duplicaron la densidad celular en comparación con los sistemas de cultivo no controlados, lo que destaca el impacto positivo de estos parámetros en el crecimiento celular.

CONTROLAR EL TAMAÑO Y LA VIABILIDAD DEL AGREGADO CELULAR MEDIANTE LA OPTIMIZACIÓN PREVIA AL CULTIVO, LA ADAPTACIÓN DE DO Y EL AJUSTE DE LA AGITACIÓN

Para abordar la pérdida inicial de células y controlar el tamaño de los agregados, se implementó un enfoque de adaptación de parámetros de cuatro etapas. Primero, la optimización previa al cultivo redujo el período de cultivo 2D a 72 horas, lo que resultó en una menor confluencia celular. Segundo, se introdujo una cascada de niveles de DO, manteniendo un nivel de DO inicial del 100% antes de estabilizarlo en el 40%. Tercero, durante la inoculación se añadió el protector para fuerzas de corte Pluronic F-68. Finalmente, la velocidad de agitación se aumentó de 60 a 80, 100 o 120 rpm para controlar el tamaño del agregado. Todos los ajustes de la velocidad de agitación redujeron con éxito la pérdida inicial de células, siendo 80 rpm suficientes para mantener el tamaño del agregado por debajo de 300 μm durante todo el experimento. A pesar de las mayores velocidades de agitación, la viabilidad celular se mantuvo comparable en todas las condiciones. Por lo tanto, se eligieron 80 rpm para equilibrar el control del tamaño de los agregados y las fuerzas de corte mínimas para experimentos posteriores.

Tasa de Alimentación y Perfusión Optimizada.

Para optimizar la alimentación de glucosa y prevenir la acumulación de lactato, la tasa de perfusión media se aumentó gradualmente de 1 a 2 volúmenes de cultivo/día entre los días 2 y 5. Simultáneamente, la concentración de glucosa se elevó de 3,15 a 6,15 g/l entre los días 1 y 3. luego a 6,15 a 7,65 g/L desde el día 4 en adelante. A pesar del aumento esperado en la producción de lactato, los niveles se mantuvieron comparables a los del enfoque sin alimentación optimizada. La densidad celular aumentó a 18 × 10 ⁶ células/ml, casi el doble que el paso de optimización anterior. En general, en comparación con las condiciones no controladas, esta estrategia de optimización integral dio como resultado un aumento de seis veces en la densidad celular al día 7 después de la inoculación en comparación con las condiciones no controladas.

MAYOR OPTIMIZACIÓN DE LA CULTURA MEDIANTE MODELADO IN SILICO.

El control preciso de los parámetros proporcionado por el sistema de mini biorreactores DASbox y la agitación suave de las células con el impulsor de 8 palas dieron como resultado un aumento notable en el número de células madre. Para mejorar aún más la densidad celular y reducir la carga de trabajo de las pruebas de laboratorio, se empleó el modelado in silico . Utilizando el software Berkely-Madonna, los resultados del paso de optimización anterior obtenidos en el laboratorio de cultivo, se incorporaron a un algoritmo para predecir enfoques de optimización de parámetros adicionales.

Ell modelo VII (Tabla 1) predijo una densidad celular de 70 × 10 ⁶ células/ml el día 7, pero los resultados reales alcanzaron 23 × 10 ⁶ células/ml, superando los ensayos anteriores. Sin embargo, un pico inesperado de glucosa en el día 6 indicó la necesidad de seguir perfeccionando este modelo. Luego se desarrolló el modelo VIII (Tabla 1) utilizando resultados de laboratorio de cultivo para el modelo VII, lo que resultó en una coincidencia más cercana entre las densidades celulares previstas (40 × 10 ⁶ células/mL) y reales (33 × 10 ⁶ células/mL). Estos resultados, confirmados en tres cultivos de líneas de células madre diferentes, representaron un aumento de la concentración celular de casi 10 veces en comparación con las condiciones no controladas.

PROPIEDADES DE LAS iPSC CULTIVADAS EN UN BIORREACTOR DE TANQUE AGITADO

Los resultados demuestran que la optimización del proceso mediante un control preciso de los parámetros en un biorreactor de tanque agitado permite un mayor número de células y al mismo tiempo mantiene una sólida viabilidad celular. El análisis de los marcadores de pluripotencia TRA-1-60, SSEA-4, OCT-3/4, NANOG, SOX2 y KI-67 confirmó la retención de las propiedades de las células madre después de 7 días de cultivo. Además, la capacidad de las células madre para diferenciarse en varios tipos de células de las capas germinales endo, meso y ectodermo, se confirmó mediante protocolos convencionales de diferenciación no dirigida y diferenciación específica. La presencia de marcadores específicos de la capa germinal y la inducción reproducible de las progenies sugirieron capacidades de diferenciación intactas. Es importante destacar que no se observaron anomalías cromosómicas en las células derivadas del proceso después de 7 días de cultivo. Estos hallazgos indican colectivamente que la población de células madre pluripotentes mantuvo todas las propiedades clave esperadas incluso después del cultivo a altas densidades celulares logradas mediante la optimización del proceso en un biorreactor de tanque agitado.

CONCLUSIONES

En conclusión, el estudio demuestra la eficacia de utilizar un entorno de crecimiento controlable y ajustable para el cultivo de células madre. Al emplear las capacidades precisas de control de parámetros del sistema DASbox Mini Bioreactor y la adaptación sistemática, las densidades de células madre aumentaron aproximadamente de 3×10 ⁶ células/mL en un entorno no controlado a casi 35×10 ⁶ células/mL, lo que resultó en un número total de células de casi 5×10 ⁹ células en el volumen total de cultivo. El impulsor de 8 palas con inclinación de 60° del Mini Biorreactor DASbox facilitó un mezclado eficiente, el control del tamaño de los agregados y una alta viabilidad celular al tiempo que minimizó la tensión de las fuerzas de corte. Este enfoque de adaptación de parámetros paso a paso ofrece un método eficiente para la optimización y el desarrollo de procesos en el cultivo de células madre dentro de biorreactores, proporcionando una hoja de ruta para superar los obstáculos en el cultivo y avanzar en las aplicaciones de células madre.

Los datos proporcionados en este artículo resumido representan sólo una fracción de la información disponible en la nota de aplicación; descargue la nota de aplicación completa para conocer todos los datos y detalles del estudio.

Para obtener más información, consulte Aumento del Número de iPSC Mediante la Optimización Sistemática del Proceso de Cultivo.

Todos los métodos y resultados de esta nota de aplicación son trabajos publicados por el grupo del Dr. Robert Zweigerdt, Laboratorios de Investigación Leibniz para Biotecnología y Órganos Artificiales, Hannover.

Fuente: Aumento del Número de iPSC Mediante la Optimización Sistemática del Proceso de Cultivo

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